乳酸桿菌鑒定試劑盒API50CHL說明書

原理

API 50 CHL是用于乳酸桿菌(Lactpbacillus)和相關菌的鑒定，它是由49種可發酵碳水化合物的API 50 CH試驗條組成的簡易培養基。以測定菌制成懸液接種試驗條的每一個小管。當培養時，由于發酵碳水化合物產酸，pH下降，使指示劑變色。結果構成菌株的生化圖譜，并用于鑒定或分型。

試劑

一套(10次測定)包括：

- 10 個API 50 CHL培養基的安瓿

- 1份說明書

附加產品(不包括在套裝產品內)：

- API 50 CH 試驗條(ref. 50 300)

- McFarland 標準(ref. 70 900)點2或光密度計： DENSIMAT(ref. 99 234)

- 鑒定軟件（請聯系生物梅里埃索取有關資料）

- 吸管或PSI管(ref. 70 250)

- 礦物油(液體石臘) (ref. 70 100)

- 安瓿架 (ref. 70 200)

- 無菌棉拭子 (ref. 70 610)

- MRS 培養基

- 懸液基物2 m l (ref. 70 700) 和5 ml (ref. 20 150)

乳酸桿菌鑒定試劑盒API50CHL操作方法：

選取菌落

l 檢查菌株的純度。

l 接種菌株于MRS培養基上，30或37℃厭氧培養24小時。培養溫度取決菌株原來的生長溫度。

l 檢查菌株歸屬于乳酸細菌群：革蘭氏(+)，接觸酶(-)，非芽孢厭氧(兼性或專性)的桿菌，能生長在MRS瓊脂上。

如果使用貯存菌株(干凍或傳代培養)在MRS肉湯傳代2次后始接種於MRS瓊脂。

接種物的制備

l 用光密度計 ：

- 按“警告和注意事項"(無滴頭安瓿) 所示，打開API 50 CHL 培養基。

- 挑取幾個一致的菌落，在API 50 CHL 培養中制得混濁度相當于2  McFarland 的菌懸液。

l 不用光密度計：

- 按“警告和注意事項"(無滴頭安瓿)所示，打開懸液基物(2 ml) 的安瓿或用不含雜質的無菌蒸 餾水試管。

- 用無菌棉簽挑取培養物上所有的細菌在管中制成濃的菌懸液(S)。

- 按“警告和注意事項"(無滴頭安瓿) 所示， 打開懸液基物 (5ml) 的安瓿，加入幾滴上述濃菌 (S)制得相當于2 McFarland濁度的菌懸液，記錄滴數(n)。

- 按“警告和注意事項"所示，打開API 50 CHL培養基的安瓿，加2倍(2n)該菌液接種。

l 均勻。

試驗條的接種

l 用巳接種的API 50 CHL 培養基加入驗條的管(不加杯)，并用油覆蓋所有的測定。

l 于30℃或37℃好養培養 48小時。

判讀試驗條

(見API 50 CH說明書)

l 在培養24和48小時后讀。

l 陽性結果：培養中所含溴甲酚紫指示劑變黃所示的產酸作用。

七葉靈測定(25號管)從紫變黑。

l 記錄于結果報告單。

所得該株菌的生化譜可用於：

l 用鑒定軟件包鑒定菌株。

l 根據記錄可與已鑒定的種比較。

與其它生化譜作分類研究。