難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法）說明書

【產品名稱】 通用名稱：難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 英文名稱：VIDAS C. difficile Toxin A&B

【包裝規格】 60 測試/盒

【預期用途】 本產品用于檢測人糞便樣本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B。 采用兩步酶免夾心法與終點熒光檢測相結合技術（ELFA）用于 VIDAS 系列儀器對大便 標本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B 進行檢測。 腸道正常菌群是抑制腸道內病原菌大量繁殖的生物學屏障。由于抗生素的大量應用破壞 了這種屏障保護作用，導致內源性或醫院獲得性病原菌如難辨梭菌的大量繁殖。 已證實難辨梭菌是抗生素相關偽膜性腸炎(PMC)的主要病原菌。偽膜性腸炎(PMC)是一 種臨床常見的與長期大量應用抗生素相關的綜合征。腸道的遠端部位乙狀結腸和直腸病變部 位可形成偽膜性結節和斑塊（1，2，3）。若偽膜性腸炎(PMC) 得不到及時診斷和治療，將 嚴重威脅病人生命。同時難辨梭菌也是抗生素相關性結腸炎和抗生素相關性腹瀉的病原菌 （4）。 難辨梭菌引起的醫院獲得性感染在某些醫院比較嚴重，易感人群常常是那些住院人數較 多的大型醫院病人,接受的病人和長期臥床病人（5，6，7）。同時,嬰幼兒和囊性纖維化 (CF) 病人也是無癥狀難辨梭菌攜帶者，嬰幼兒攜帶率可達 50%（8），囊性纖維化 (CF)病人達 32% （9）。 難辨梭菌相關性疾病 (CDAD) 有很多臨床診斷指標,一般包括 : 超過 36 小時有 6 次以 上未成形大便,抗生素應用 8 周出現腹瀉癥狀，無明顯誘因的腹瀉以及藥物治療中出現的反 應（10）。 難辨梭菌分為產毒株和非產毒株。產毒株一般同時產腸毒素(毒素 A)和細胞毒素(毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 2 B)。 但難辨梭菌某些菌株（如血清型 F）僅產 B 毒素，不產 A 毒素。由于通常的實驗方法 僅檢測 A 毒素，則可能出現漏診（2，11）。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫法）用于協助診斷難辨梭菌相關性疾病 (CDAD)。該試劑可檢測大便標本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B（13）。

【檢驗原理】 檢測采用兩步酶免夾心法與終點熒光檢測相結合技術（ELFA）。 固相管(SPR)具有兩種作用：固相載體和加樣。檢測試劑隨時可用且預先加在了密封的 試劑條內。 儀器自動完成 4 個檢測步驟。反應液在 SPR 內外循環數次。每步反應后開始清洗循環 以除去未結合成份。 l 標本中的毒素 A 和/或 B 與 SPR 內面包被的抗毒素 A 抗體（兔多克隆）和 B 抗體（鼠 單克隆）特異性結合。 l 毒素 A 與標記生物素的抗毒素 A 抗體（鼠單克隆）結合，毒素 B 與標記生物素的抗毒 素 B 抗體（鼠單克隆）合物。 l 堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素與生物素共同孵育以檢測生物素。 l 檢測：堿性磷酸酶將底物（4-甲基傘形酮磷酸酯）水解為可用 450nm 波長檢測的熒光 產物（4-甲基傘形酮）。 熒光強度隨標本中毒素 A 和/或 B 的含量升高而升高。 難辨梭菌毒素 A/B(CDAB)檢測試驗完成后儀器自動分析結果，給出試驗值并打印每份 標本的結果。

【主要組成成分】 試劑盒組成：60 測試 60 個試劑條 （CDAB STR） STR 即用型。 60 個固相管 （CDAB SPR） （2 x 30） SPR 即用型。難辨梭菌兔多克隆抗毒素 A 抗體和小鼠單克 隆抗毒素 B 抗體。 1 瓶標準品 （CDAB S1） （1 x 4 mL） （液體） S1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2）+5% BSA+防腐劑稀釋 的難辨梭菌 A 毒素 1 瓶陽性對照品（CDAB C1） （1 x 4 mL） （液體） C1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 A 毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 3 試驗值范圍標在 MLE 數據上：對照品 C1（+）試驗值范 圍 1 瓶陰性對照品（CDAB C2） （1 x 4 mL） （液體） C2 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑 試驗值范圍標在 MLE 數據上：對照品 C2（-）試驗值范 圍 1 瓶陽性對照品（CDAB C3） （1 x 4 mL） （液體） C3 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 B 毒素 試驗值范圍標在 MLE 數據上：對照品 C3（+）試驗值范 圍 1 瓶標本稀釋液（CDAB R1） （1 x 61mL） （液體） R1 即用型。0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +50%小牛 血清+去污劑+ 防腐劑 校準試驗所需的出廠主體數據質量標準 — MLE 數據（主批次錄入）提供于試劑盒中或從  網站下載。 — MLE 條形碼打印于盒標簽或從  網站下載。 1 份包裝說明書在試劑盒中或從  網站下載。 固相管（SPR）： SPR 內壁包被抗難辨梭菌 A 毒素和抗難辨梭菌 B 毒素抗體。SPR 可通過 CDAB 標記識 別。從鋁箔袋中取出所需數量 SPR。用后務必密封好鋁箔袋。 試劑條（STR）: 試劑條由 10 個孔組成并用鋁箔密封。鋁箔上標有條形碼，內容包括試劑代碼、試劑批 號、有效期等信息。第一孔未密封，用于加標本。最后一孔為透明小管用于讀取熒光值。中 間八孔內含各種檢測試劑。 CDAB 試劑條成份 孔 試劑 1 標本孔 2-3-4 洗液: 0.05mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2)+去污劑+防腐劑(600uL) 5 標記物:生物素標記的鼠抗難辨梭菌 A 毒素抗體+生物素標記的鼠抗難辨梭菌 B 毒 素抗體+防腐劑 (400µL) 6 示蹤劑 : 堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素+0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 6.0) + 防腐 劑(400 µL) 7-8-9 洗液: 0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2) +去污劑+防腐劑(600 µL) 10 含底物的透明小管: 4-甲基傘形酮磷酸酯(0.6mmol/L)+二乙醇胺 DEA* (0.62mol/L 或 6.6%) pH9.2 + 1g/l 疊氮鈉 (300 µL) *刺激性試劑: - R 36:對眼睛有刺激性。 - S 26:如果接觸眼睛, 立即用大量清水沖洗并尋求醫生幫助。更多信息請參閱安全條例。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 4 必需但試劑盒中未提供的材料和耗材 - 加樣槍帶一次性加樣頭，加樣量 300µL ，200µL 和 1000µL。 - 一次性無粉乳膠手套。 - 離心機，大于 12,000×g。 - 聚丙烯或其他合適的離心管，用于標本稀釋和離心(容量至少為 1.5 mL)。 - 標本移液管用于量取適量大便標本。 - 涂樣棒或涂樣環 - 其它特殊材料和耗材，請參見儀器用戶手冊。 - VIDAS 系列儀器

【儲存條件及有效期】 ? 2～8℃儲存，有效期 12 個月。 ? 禁止冷凍試劑。 ? 所有未用試劑存于 2～8℃。 ? 打開試劑盒后,檢查 SPR 鋁箔袋密封是否完好且無損壞。否則,請勿使用 SPR。 ? 為保持 SPRs 穩定性，取出所需 SPR 后請將有干燥劑的袋重新仔細密封并將整個試劑盒放 回 2～8℃。 ? 按推薦的環境儲藏試劑盒,可確保所有成份在標注的效期內穩定。

【適用儀器】 - VIDAS 系列儀器: VIDAS mini VIDAS VIDAS 3

【樣本要求】 標本類型、采集與儲存 根據實驗室標準程序采集大便標本并儲存于 2～8℃待處理。 標本采集后應盡快送至實驗室。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 5 大便標本制備前在 2～8℃可保存最多 3 天 (自采集之日起)，不會明顯損失難辨梭菌毒素 A/B。不建議在 2～8℃保存超過 3 天。標本在-25℃±6℃冷凍可保存 1 個月或-70℃（或更低 溫度）保存 1 個月以上。避免標本反復凍融。由于肛拭子采集標本量太少，不建議用此方 法。避免使用可能含去污劑、防腐劑或培養基的容器裝標本。因為這些成份會干擾難辨梭菌 毒素 A/B 的檢測結果。 制備 CDAB 試驗的標準、質控和標本 標本 注意: 制備大便標本前充分混勻非常關鍵。混勻不充分可導致錯誤結果。為避免發生此問題， 必須混勻大便標本。稀釋的標本也必須混勻，有助于保證獲得可靠結果。 液體大便： 1、 通過移液管反復抽吸使大便均一化。 用移液管將 200µL 液體大便加入一清潔離心管中； 2、 使用帶有一次性吸頭的移液器，在離心管中加入 1000µL 標本稀釋液（R1）。 3、 通過移液管反復抽吸使大便再次均一化。 然后使用漩渦震蕩器*混勻。 確保標本與標本稀釋液（R1）*混勻。 4、 離心：2～25℃，最小 12,000 g，離心 5 分鐘。 5、 使用帶有一次性吸頭的移液器，取 300µL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測。 注意:離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時加樣頭應伸入表面以下。 半固體和固體大便： 1、 為準確取 200mg 半固體或固體大便，首先取 200µL 蒸餾水加入一清潔離心管。此離心 管作為“參照管"。 2、 另取一清潔離心管作為標本管，用潔凈木棍挑取一定量大便（200mg）加入標本管，所 取大便體積與“參照管"液面相同即可。 注意：取完固體或半固體大便標本，可丟掉“參管"。 3、 取 1000µl 標本稀釋液（R1）加入標本管 4、 用漩渦震蕩器*混勻。標本與標本稀釋液（R1）一定要混勻。 5、離心：2～25℃，以最小 12,000 g 的速度離心 5 分鐘。 6、至少取 300µL 上清用于難辨梭菌毒素 A/B 檢測。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 6 注意: - 離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時加樣頭應伸入表面以下。 - 如果半固體標本所含液體成份比固體成份多，標本制備可參考液體大便制備方法（見“標 本：液體大便） 標準和質控： 標準和對照品： 標準品（S1）,陽性對照品（C1、C3）和陰性對照品(C2)必須與病人標本用相同的制備方法 處理。 1， 使用漩渦震蕩器混勻。 2， 使用帶有一次性吸頭的移液器收集 200ul 標準品或對照品品至潔凈離心管中。 3， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 1000ul 標本稀釋液（R1），加入離心管。 4， 使用漩渦震蕩器混勻。 5， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 300uµL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測。 已制備標本的保存： 如不能立刻進行難辨梭菌毒素 AB 檢測，已制備的標本上清、標準和對照品可在 2～8℃保 存不超過 48 小時。 超過 48 小時的上清、標準和對照品必須丟棄。